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                  熒光標記細胞株分離與培養要求

                  點擊次數:300 發布時間:2022-01-14
                     熒光標記細胞株使用注意事項:
                    1、懸浮細胞用此法時必須經離心后才能吸出上清再加DMSO。
                    2、Formazan 的生成不僅與活細胞數成比例,也受作用時間的影響,因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
                    3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時,請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
                    4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

                    熒光標記細胞株分離與培養:
                    1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大??;
                    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
                    3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
                    4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
                    5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
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