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Hela/DDP細胞株篩選的方法

點擊次數:147 發布時間:2021-06-23
   Hela/DDP細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過危機而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代,這種傳代細胞叫做細胞株。
  Hela/DDP細胞株篩選的方法:
  單克隆環法篩選:
  單克隆環法主要用于整合率低的轉染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環法具有工作量小的優點,只要把轉染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養皿,用合適的藥物篩選并在培養皿中進行擴增,適合少量勞動力作業,其劣勢可能難以獲得高產率的穩定細胞株。
  逆轉錄病毒的混合克隆技術篩選:
  此法可用于制備穩定混合細胞株,其優點在于能在短時間內得到穩定的細胞株,且能在任何時候將細胞稀釋成新的培養皿,傾向于整合靠近轉錄始端的位點的基因,容易激活下游基因,但同時這些整合到轉錄活性基因的基因很容易導致整合部位基因的插入失效,影響到克隆的純度。高等細胞株中存在非整合細胞,這種混合細胞內的細胞穩定結合,不會失去生長的優勢。
  Hela/DDP細胞株培養步驟:
  1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜,培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
  2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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